Förbättrade metod för att avslöja gendoping genom sgRNA

Förbättrade metod för att avslöja gendoping genom sgRNA-identifiering

Oro för genmanipulering har stadigt ökat på grund av framsteg inom genetisk ingenjörskonst, särskilt med framväxten av verktyg baserade på clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated (CRISPR/Cas). Dessa verktyg erbjuder inte bara oöverträffade möjligheter för olaglig prestationsförbättring av idrottare utan erbjuder också nya vägar för upptäckt av genmanipulering genom biosensorer för nukleinsyror. Därför följde vi upp på en tidigare studie genom att optimera en analytisk metod baserad på reverse transcriptase-recombinase polymerase amplification (RT-RPA) och efterföljande kvalitativ detektion av nukleinsyror med hjälp av specific high sensitive enzymatic reporter unLOCKing (SHERLOCK) för direkt detektion av sgRNA associerad med Streptococcus pyogenes i serum. Detektionsenheten, testparametrar och provhantering justerades för att övervinna tidigare identifierade testbegränsningar. Den genomförda metodkaraktäriseringen bekräftade metodens specificitet och ökade detektionskänsligheten från 100 pM till 1 fM sgRNA i 100 μL serum. Dessutom genomfördes omtestning av in vivo-musadministrationprover som samlats in i en tidigare konceptstudie, med framgångsrik identifiering av sgRNA i alla förväntade prov efter administration inom den 24-timmars samlingsperioden. Dessa resultat stöder tillämpningen av den förbättrade analytiska metoden för upptäckt av olagliga dopningsförsök via ribonukleoproteinbaserad CRISPR/Cas-applikation genom sgRNA-identifiering och erbjuder en ny potentiell dopningskontrollstrategi för CRISPR-relaterad genmanipulering.

Referens: Passreiter A, Naumann N, Thomas A, Grogna N, Delahaut P, Thevis M. Detection of sgRNA via SHERLOCK as potential CRISPR related gene doping control strategy. Anal Chem 2024 Apr 29 [Online ahead of print].