DOPINGPREPARAT I HÅRSTRÅN 2.1

(Senast reviderad 2024-12-04)

DOPINGPREPARAT I HÅRSTRÅN

(och naglar)

Svenska Antidopingbiblioteket

INNEHÅLL

INTRODUKTION

Möjligheter till dopingtestning via hår

Användningen av hår som ett alternativt och/eller kompletterande material har ökat inom toxikologiska undersökningar, med flera kliniska och rättsmedicinska tillämpningar, inklusive drogtester på arbetsplatser, behandlingsprogram för drogmissbruk, droginducerade sexuella övergrepp (DFSA), efterlevnadskontroller av droganvändning och övervakning av drogavhållsamhet samt långtidsuppföljning av droganvändning hos levande och avlidna individer. Hår är en särskild matris eftersom ingen aktiv läkemedelsmetabolism eller utsöndring sker inom dess struktur när droger väl har deponerats, förutom att kosmetiska behandlingar kan delvis bryta ner de inkorporerade drogerna.

Trots dess omfattande användning är kunskapen om detekterbara ämnen i hår begränsad. Medan blod ger en avläsning på ”minuter till timmar” av ett läkemedls metaboliska tillstånd, erbjuder urin ett mönster av utsöndrade läkemedelsmetaboliter ”timmar till dagar.” Hår har framhållits som ett värdefullt analytiskt prov för långsiktig och retrospektiv upptäckt av läkemedel. Jämfört med kortvarigt läkemedelsförekomst i biovätskor, mäter håranalys över !månader till år”, vilket korrelerar med specifika exponeringstider på grund av hårets genomsnittliga tillväxthastighet på cirka en centimeter per månad. Ämnen kan deponeras i håret efter administrering genom blodcirkulationen, vilket involverar tre primära mekanismer:

transport från blodkapillärer till växande celler belägna mellan matrixceller och slutet av keratiniseringszonen i hårfollikeln

överföring från djupa hudkompartimenter under hårskaftsbildningen

introduktion via svett eller talgsekretioner i hårskaftet

Hårtestning har vanligtvis använts inom området rättsmedicinsk toxikologi, särskilt vid utredning av fall av förgiftning eller dödsfall med exponering för missbruksämnen, inklusive amfetaminer, cannabinoider, kokain och opiater. Dess potentiella tillämpning sträcker sig till att avslöja historiken av doping inom idrotten. Dock är kunskapen om vilka ämnen som är påvisbara i hår fortfarande begränsad till ett fåtal utvalda föreningar identifierade från mycket få verkliga fall, som omfattar både post-mortem-scenarier och situationer med idrottare. Den verkliga inkorporeringen av ämnen i hår uppnås genom deras absorption och distribution inom en organism, en fenomen som inte kan återskapas noggrant genom att konstgjort berika eller blötlägga hundratals kemiska standarder på hårskaften, som har noterats annorstädes. Tydliga skillnader i mekanismerna för läkemedelsdistribution mellan blötlagda hårsprov och faktiskt hår från användare har etablerats genom avbildningsobservationer på hårsnitt. För att förbättra vår förståelse för påvisbara dopingsämnen i hår introducerade denna studie en djurmodell som fick en delmängd av modellföreningar som representerar specifika klasser av ämnen som är förbjudna inom idrotten, eftersom att administrera dem en efter en till en organism skulle vara opraktiskt. Undersökningen fokuserade på jämförelser av substansnivåerna som hittades bland biospecimina (till exempel hår, urin, blod och avföring) som härstammade från en säkerställd mängd exponering för ämnet till systemet, därigenom bortser från potentiella läkemedelsinteraktioner inom blandningen.

Inledningsvis fick en djurmodell 17 modellläkemedel för att jämföra dosberoenden och detektionsfönster över olika matriser. Därefter extrapolerades hårincorporationsdata från djurförsöket till alla ämnen på WADA:s lista genom in-silico-prediktion. Detekterbarheten av ämnen i hår validerades ytterligare i en konceptbevisande människostudie som innefattade konsumtion av diuretika och maskeringsmedel. Semi-kvantitativ analys av ämnen i prov togs fram med hjälp av ultraprestanda-flytande kromatografi-tandem masspektrometri.

Resultaten visade att plasma hade optimala dosberoenden med begränsade detektions-fönster, medan urin, avföring och hår uppvisade en rimlig relation med den administrerade dosen. Hår visade signifikant högst detektionsfrekvens (14 av 17) för föreningar, inklusive anabola medel, hormoner och diuretika, medan beta-2-agonister inte detekterades. Diuretika som furosemid, canrenon och hydroklortiazid visade högst hårinkorporation. Äkta mänskligt hår bekräftade diuretikas detekterbarhet, och deras användningsperiod bestämdes genom segmentell analys. Värt att notera är för första gången rapporteringen av canrenon i mänskligt hår. Anabola medel förväntades finnas i hår, medan oidentifierbara föreningar, såsom peptidhormoner och beta2-agonister, sannolikt berodde på stor molekylvikt eller hög polaritet. Denna studie förbättrar förståelsen för håravläsning vid dopingutredningar och ger insikter om ämnesdetekterbarhet.

Håranalys efter intag av dopingpreparat

Håranalys är en avgörande metod inom rättsmedicinsk toxikologi med potentiella tillämpningar för att avslöja dopinghistorik inom idrotten. Trots dess omfattande användning är kunskapen om vilka ämnen som kan upptäckas i hår begränsad. Denna studie utvärderade systematiskt möjligheten att upptäcka förbjudna ämnen inom idrotten genom att använda en mångfacetterad metod.

Inledningsvis användes en djurmodell en delmängd av 17 modellläkemedel för att jämföra dosberoenden och upptäcktsfönster för olika matriser. Därefter extrapolerades hårintegrationdata från djurexperimentet till alla ämnen på WADA:s lista genom in silico-prediktion. Upptäckbarheten av ämnen i håret validerades ytterligare i en proof-of-concept-människostudie som involverade intag av diuretika och maskeringsmedel. Semikvantitativ analys av ämnen i prover utfördes med hjälp av ultra-prestanda vätskekromatografi-tandem-masspektrometri. Resultaten visade att plasma hade optimala dosberoenden med begränsade upptäcktsfönster, men urin, avföring och hår uppvisade också en rimlig relation till administrerad dos.

Intressant nog visade hår den högsta sannolikheten för upptäckt (14 av 17) för föreningar, inklusive anabola medel, hormoner och diuretika, medan beta2-agonister inte kunde upptäckas. Diuretika som furosemid, canrenon och hydroklortiazid visade högst hårintegration. Äkta mänskligt hår bekräftade diuretikas upptäckbarhet, och deras användningstid bestämdes genom segmentanalys. Noterbart är den första rapporteringen av canrenon i mänskligt hår. Anabola medel förväntades finnas i håret, medan odetekterbara föreningar som peptidhormoner och beta2-agonister troligen berodde på stor molekylmassa eller hög polaritet. Denna studie förbättrar förståelsen för håranalys inom dopingutredningar och ger insikter om ämnesdetekterbarhet.

YTTRE FAKTORER SOM PÅVERKAR MÄTVÄRDENA

Effekten av stress på anabola steroider mätbara i hår efter en engångsdos

Hårsteroidanalyser erkänns i allt högre grad för sin förmåga att fånga upp kumulativ hormonutsöndring, vilket tros spegla en individs respons på långvariga miljöförhållanden. Trots dess ökande användning är påverkan av enskilda, isolerade händelser på hårsteroidk-oncentrationer fortfarande outforskat. En studie undersökte därför effekterna av en engångs-dos transdermal testosteronadministration (150 mg) och akut laboratorie-inducerad stress på nivåerna av testosteron och kortisol i hår. Studien genomfördes med ett randomiserat, placebo-kontrollerat och dubbelblint designupplägg mellan olika testgrupper.

Analys med vätskekromatografi-tandem-masspektrometri visade en signifikant ökning av testosteronnivåerna i hår sju veckor efter testosterontillförseln, vilket understryker håranalysens effektivitet i att upptäcka engångsanvändning av hormoner. Dessutom observerades en signifikant höjning av kortisolnivåerna i hår sju veckor efter exponering för det laboratorieinducerade kroppsliga stressmomentet (Cold Pressor Test), vilket belyser håranalysens förmåga att fånga upp experimentellt framkallade hormonella responser.

Vidare visade utforskningen av kontextuella faktorer att individer i fasta relationer hade lägre nivåer av både kortisol och testosteron i håret jämfört med dem som var singlar eller i icke-committerade relationer. Studien ger nya insikter i håranalysens känslighet för att upptäcka hormonella förändringar efter engångsdoser av hormoner och kortvariga experimentellt framkallade stresshändelser. De explorativa fynden betonar vikten av individuella kontextuella faktorer för att påverka hormonkoncentrationer i hår och lägger grunden för vidare forskning om dynamiken i kumulativa hormonmätningar i hår.

TEORETISKA ÖVERVÄGANDEN

Håranalys kan komplettera urinanalyser vid dopingmisstanke

Vid ett positivt dopingprov kan en låg (uppskattad) urinkoncentration bero på två mycket olika situationer: det kan vara slutfasen av ett läkemedel som medvetet konsumerats för att förbättra en idrottsprestation, även genom mikrodosering (vilket inte är effektivt för alla läkemedel), eller det kan vara resultatet av en kontaminering, oavsett dess källa. För många dopingsmedel kan ett hårtest göra det möjligt att skilja på doping och kontaminering baserat på den uppmätta koncentrationen eller till och med frånvaron av det aktuella läkemedlet. Eftersom hår producerar inkrementella koncentrationer, erbjuder dess analys möjligheten att fastställa ett mönster av doping och därmed verifiera självrapporterade exponeringar.

För att tillhandahålla en retrospektiv kalender av droganvändning kan segmentanalys av hårstrået utföras. Inom doping är den vanliga metoden att testa substansen i korta segment, såsom 1 cm, för att undvika utspädning av läkemedlet när man använder större segment. Under de senaste månaderna har sju idrottare lämnat ett positivt dopingprov för det vätskedrivande medlet klortalidon, med rapporterade urinkoncentrationer i intervallet 20 till 50 ng/mL. Alla dessa idrottare skickade, via sina juridiska ombud, in sitt hår för att fastställa ett exponeringsmönster. Resultaten var alltid förenliga med oavsiktlig kontaminering (hårkoncentration lägre än 5 pg/mg), även om källan till kontamineringen aldrig identifi-erades. Tolkningen av resultaten fastställdes med hänsyn till den begränsade litteraturen, inklusive hårtester efter mikrodosering och terapeutisk användning.

MÄTNING AV SPECIFIKA DOPINGSUBSTANSER

Clostebol i hårstrån (1)

Även om WADA inte erkänner användningen av hår eller nagelklipp som rutinmässiga dopingskontrollmatriser, kan dessa prover erbjuda ytterligare bevis för resultatbedömning. På det sättet är analysen av biologiska keratinösa matriser ett komplement och inte ett alternativ till standard antidopingmetoder. Det är allmänt accepterat av forskare att ett negativt hårtest inte kan ersätta ett positivt urinprov, särskilt eftersom detta kan tolkas som en brist på känslighet hos testet (det vill säga att hårtestet inte kan upptäcka den låga mängd som kommit in i individens kropp, eller att läkemedlet har en begränsad förmåga att inkorporeras i hårstrån på grund av dess kemiska struktur). Detta har observerats när en överträdelse av antidopingregler som involverar anabola steroider, SARMs som ostarin eller ligandrol eller diuretika har ifrågasatts. Att testa droger i hår för att dokumentera exponering har varit erkänt sedan tidigt 80-tal och drar nytta av en längre detektionsperiod jämfört med blod och urin, samt mindre besvärande insamlingsvillkor och förvaring/transport i rumstemperatur. Hårtester är användbara för att verifiera läkemedelsexponering i situationer där ett mönster av läkemedelsanvändning måste fastställas. För detta kan segmentanalys utföras genom att klippa håret i 1 eller 2 cm segment för att mäta läkemedelsanvändning under kortare tidsperioder. Med en genomsnittlig tillväxthastighet på 1 cm per månad representerar varje cm hår i hjässregionen vad som fanns i kroppen under motsvarande månad. Nästan alla dopingsmedel, förutom hormoner, är detekterbara i hår.

Identifiering av clostebol i hår har sällan rapporterats och litteraturen saknar kontrollerade studier. Idag är den minimala detekterbara dosen av clostebol i hår okänd. För att producera en anabol effekt måste administration av clostebol dock upprepas, helst dagligen under flera veckor, för att underlätta att molekylen inkorporeras i håret. I hår är målsubstansen clostebolacetat eftersom clostebol i sig själv aldrig har rapporterats. Till skillnad från urin, där gaskromatografi efter derivatisering är den föredragna tekniken för att mäta M1-metaboliten, föredras vätskekromatografi för hår.

En låg urinkoncentration kan tolkas på två olika sätt: 1. det kan vara slutskedet av ett läkemedel som avsiktligt använts för att förbättra prestation; eller 2. det är en direkt följd av en kontaminering. Med kontaminering kan man inkludera preparat som innehåller tillsatta substanser, antingen avsiktligt eller på grund av bristande hygienåtgärder; kontaminerat kött från tillväxtfrämjande medel; läkemedel av dålig kvalitet med kemiska rester, och slutligen läkemedelsöverföring under intima stunder eller olika andra scenarier. Detta har sammanfattats av Thevis et al. under begreppet ”idrottares exponom”.

För att hävda kontamineringsscenariot föreslog Kintz 2021 följande strategi: 1. koncentrationen i idrottarens urin måste vara låg eller långt ifrån en terapeutisk eller rekreativ koncentration; 2. ett hårtest av idrottaren måste påvisa oavsiktlig exponering; 3. källan till kontamineringen måste identifieras; och 4. en oberoende farmakolog eller toxikolog måste verifiera idrottarens påståenden, särskilt för att visa att exponeringen var oavsiktlig och att idrottaren inte kände till kontamineringskällan.

Clostebol i hårstrån (2)

Clostebol, en 4-klorderivat av testosteron, är tillgängligt som receptfritt läkemedel på apotek och i butiker i flera länder, inklusive Italien och Brasilien. Det säljs emellertid uteslutande som kräm eller spray, oftast under varumärket Trofodermin®. Den aktiva ingrediensen är esterformen clostebolacetat, och i Trofodermin®-beredningar kombineras clostebolacetat alltid med neomycin. En tub innehåller 30 g kräm med 5 mg/g clostebolacetat, totalt 150 mg clostebolacetat, medan sprayen innehåller 5 mg/mL clostebolacetat i 30 mL. Med förhoppning om terapeutiska egenskaper hos denna anabola steroid rekommenderas Trofodermin® för att läka mindre hudskador (t.ex. skärsår, hudsår eller skrubbsår) eller gynekologiska skador. Däremot är inga tabletter, kapslar, injektioner eller andra farmaceutiska beredningar av clostebol godkända för humant bruk. Illegala preparat kan dock hittas på svarta marknaden, och det verkar som om vissa har använts för doping-ändamål tidigare.

Flera metaboliter har upptäckts i urinen hos personer som exponerats för clostebol, inklusive glukuronid- och sulfatmetaboliter. Vid dopingkontroll är nyckelmetaboliten M1-metaboliten, eller 4-kloro-androst-4-en-3alfa-ol-17-on. Denna förening är svår att få tag på, vilket begränsar privata laboratorier som kan erbjuda tester åt idrottare som försöker få sin urin kontrollerad utanför officiella anti-dopingsprogram. För att avgöra om en idrottare har intagit, exponerats för eller administrerats clostebol, kan laboratorier som är ackrediterade av WADA välja att testa för någon av de kända clostebolmetaboliterna.

Liksom andra anabola steroider är clostebol upptaget på WADA:s lista över förbjudna substanser (klass S1.1, exogena androgena anabola steroider) och är förbjudet vid alla tidpunkter. Alla administreringsvägar är förbjudna, inklusive den topikala. Användningen av Trofodermin® är därför helt förbjuden för idrottare, och förpackningen har en “doping”-märkning, men inte själva tuben eller sprayen. Från och med 2018 har WADA rapporterat en liten ökning av antalet positiva testresultat som involverar clostebol, från 25 positiva fall av 4 117 (0,61 %) år 2018 till 25 positiva fall av 2 680 (0,93 %) år 2022. Enligt WADA:s statistik observeras mer än hälften av de positiva testresultaten för clostebol i Italien, där metaboliten M1 har en koncentration lägre än 2 mikrig/L (ng/mL) i 77 procent av fallen.

Även om closteboltabletter eller injicerbara former av clostebol (som kaproat eller propionat) finns i vissa delar av världen, handlar nästan alla fall som rapporterats i litteraturen om missbruk av Trofodermin® genom topikal administrering. I en publikation från 1992 rapporterades också att en clostebolmetabolit (4-kloro-delta-4-androstene-3-α-ol-17-on) kunde detekteras efter konsumtion av kontaminerat kött, men detta har aldrig observerats senare, troligen på grund av EU:s regler för köttkonsumtion.

Clostebolacetat är en lipofil substans som långsamt penetrerar epidermis och dermis. I hypodermis diffunderar det och förblir kvar under lång tid, vilket möjliggör snabb effekt vid skador av den typ man tänkte sig för Trofodermin®. Denna administreringsväg kan dock också leda till betydande absorption i systemiska kretsloppet och därigenom distribution i hela kroppen. Slutligen metaboliseras läkemedlet och utsöndras i urinen, där det kan detekteras vid anti-dopings- eller toxikologiska analyser.

Studier har visat att kontrollerad transdermal applicering av clostebolacetat kan ge detekter-bara mängder metaboliter i urin, även efter en enda exponering. Metabolit M1 kunde detekteras upp till 30–40 mikrog/L vid toppnivåer i mer än tio dagar. Dessutom har överföring av clostebol från en person till en annan via handskakningar eller sexuell kontakt rapporterats. Även överföring under behandling av en hund med Trofodermin®, köpt i Italien, har rapporterats och erkänts som möjligt av idrottsmyndigheter.

Vid fall av läkemedelsöverföring mellan två personer är, som förväntat, urinkoncentrationerna av metaboliten M1 lägre än vid direkt intag, och överstiger generellt inte 1–5 mikrog/L. Överföring av ett läkemedel till en idrottare under intima stunder är ett av de största bekymren vid korskontaminering mellan två individer och är föremål för fler kontroverser eftersom det rör privatlivet. WADA är fullt medvetna om möjligheten till överföring via huden, vilket framgår av ett uttalande som gjordes 2021 som svar på en dokumentär publicerad av den tyska TV-kanalen ARD. WADA nämner specifikt den “mycket begränsade” risken för kontaminering via huden och därmed en antidopingsöverträdelse, till exempel vid sabotage. Att testa för andra metaboliter, såsom sulfatmetaboliten, gör det inte möjligt att definitivt avgöra administreringsvägen för clostebol, det vill säga topikal, oral eller intramuskulärt.

Tack vare betydande framsteg inom känslighet och specificitet hos dagens analytiska instrument (till exempel högupplöst masspektrometri) är det inte ovanligt att rapportera urinkoncentrationer av ett dopingmedel i det låga ng/L-intervallet. Vid begäran om laboratoriedokumentation från ett WADA-ackrediterat laboratorium framgår det alltid att kriterierna för identifiering av läkemedlet, inklusive dess retentionstid och kvoter mellan övergångar, uppfylls, även vid mycket låga koncentrationer. Detta visar otvetydigt att läkemedlet eller dess metabolit finns i provet. Enligt WADA:s regelverk behöver den farmakologiska (eller toxikologiska) betydelsen av en så låg koncentration inte diskuteras, och idrottaren anses ha brutit mot antidopingsreglerna. Det kan dock ifrågasättas om det är tillräckligt att identifiera några ng/L (pg/mL) av ett dopingmedel för att utdela en fyraårig avstängning utan vidare utredning.

En låg urinkoncentration kan tolkas på två sätt: 1. som slutet av en avsiktlig användning av ett läkemedel för att förbättra prestation; eller 2. som en direkt följd av kontaminering. Kontaminering kan innefatta förorenade kosttillskott, antingen avsiktligt eller på grund av bristande hygieniska åtgärder; kontaminerat kött med tillväxtfrämjare; läkemedel av låg kvalitet med kemiska rester; samt läkemedelsöverföring under intima stunder eller andra scenarier.

Även om WADA inte erkänner användning av hår- eller nageltester som en rutinmässig matrismodell inom dopingkontroll, kan dessa prover erbjuda ytterligare bevis vid hantering av resultat. Analys av keratinbaserade biologiska prover fungerar som ett komplement, inte ett alternativ, till standardantidopingspraxis. Forskare är allmänt överens om att ett negativt hårtest inte kan övertrumfa ett positivt urinprov, särskilt eftersom det kan tolkas som en bristande känslighet hos testet (det vill säga att hårtestet inte kan upptäcka den låga mängd som tagits in i kroppen eller att läkemedlets kemiska struktur begränsar dess inkorporering i hår). Detta har observerats vid utmaningar mot antidopingsöverträdelse gällande anabola steroider, SARM:s som ostarin eller ligandrol, eller diuretika. Tester av hår för att dokumen-tera exponering har använts sedan tidigt 1980-tal, med fördelen av en längre detektionstid jämfört med blod och urin, samt mindre besvärliga insamlingsförhållanden och förvaring vid rumstemperatur. Hårtester är användbara för att verifiera läkemedelsexponering i situationer där ett mönster av läkemedelsanvändning måste fastställas. Segmenterad analys kan utföras genom att klippa håret i segment om 1 eller 2 cm för att mäta användning under kortare tidsperioder. Med en genomsnittlig tillväxthastighet på 1 cm per månad representerar varje centimeter hår från vertexområdet vad som fanns i kroppen under motsvarande månad. Nästan alla dopingmedel utom hormoner är detekterbara i hår.

Identifiering av clostebol i hår har sällan rapporterats, och litteraturen saknar kontrollerade studier. Idag är den minsta detekterbara dosen av clostebol i hår okänd. För att ge en anabol effekt måste dock administreringen av clostebol upprepas, helst dagligen under flera veckor, för att möjliggöra molekylens inlagring i håret. I hår är målföreningen clostebolacetat, eftersom clostebol i sig aldrig har rapporterats. Till skillnad från urin, där gaskromatografi efter derivatisering är den föredragna tekniken för att mäta metaboliten M1, används vätskekromatografi i hår. I en studie har man dock mätt clostebolacetat i koncentrationer mellan 3 och 21 pg/mg hos fyra positiva individer.

Efter att ha överfört läkemedel från sin hund genom att spraya Trofodermin® på hundens tre skadade tassar och genom att dela samma säng, identifierade i en annan studie clostebol-acetat i nivåer på 52 och 78 pg/mg i två på varandra följande hårsegment hos en idrottare som utmanade sin dopinganklagelse. Hundens hår, insamlat nära skadorna, testades positivt för clostebolacetat med en koncentration på 980 pg/mg. I detta fall fastställde Idrottens skiljedomstols avdelning för antidoping att idrottaren begick en antidopingöverträdelse, men under omständigheter som bedömdes som “utan skuld”.

Ett nyligen inträffat fall med en toppidrottare har orsakat många diskussioner i den veten-skapliga gemenskapen. Det handlar om en manlig idrottare som hade ett positivt dopingprov med en urinkoncentration av metaboliten M1 under 0,1 mikrog/L. Idrottaren hävdade att provsvaret orsakades av kontaminering från hans massör, som använde en spray av Trofodermin® för att behandla ett sår på handen. I stället för en provisorisk avstängning under månader (eller år) och en negativ påverkan på idrottarens rykte, beslutade en oberoende skiljedomstol från International Tennis Integrity Agency (ITIA) i tysthet att det handlade om “ingen skuld eller vårdslöshet”. Detta skapade en ojämlik behandling jämfört med idrottare som tidigare fått flera månaders eller till och med flera års avstängning.

Även om syftet med denna artikel inte är att diskutera ITIA:s beslut, finns det ett intresse av att diskutera de vetenskapliga aspekterna av fallet. Baserat på detaljerna i ITIA:s beslut reproducerade författarna ett liknande protokoll för kontaminering och testade urinen hos en individ som fick massage 21 timmar efter att massören hade sprayat Trofodermin® på ett finger för att simulera en sårbehandling. Metaboliten M1 bekräftades i urinen hos den kontaminerade individen vid en nivå av 0,52 μg/L, vilket bekräftar möjligheten av korskonta-minering.

Under de senaste åren har vissa av författarna hanterat mer än 20 dopingsfall med clostebol, där idrottare har kunnat identifiera källan till oavsiktlig exponering genom användning av Trofodermin® eller Veterabol®. I fall där exponeringen ansågs vara indirekt (det vill säga när Trofodermin® inte användes av idrottaren utan av någon som på något sätt interagerade med idrottaren), var urinkoncentrationen av M1 som mättes av WADA-laboratoriet alltid under 1 mikrog/L.

För att undvika utdragna diskussioner om möjlig kontaminering är det inte orimligt att fastställa en rapporteringsgräns för M1. Författarna föreslår att WADA:s medicinska kommission utvärderar möjligheten att rapportera resultatet av urintestet som en atypisk fyndighet, liknande hur det görs för clenbuterol, förutsatt att koncentrationen inte överstiger 1 eller 2 mikrog/L.

Författarna har lång erfarenhet av håranalys, vilket ofta har klargjort ursprunget och frekvensen av användning av lagliga och olagliga substanser. Vid exponering för clostebol genom hudkontaminering förväntas hårkoncentrationen vara i den låga pg/mg-nivån, eller till och med odetekterbar. Däremot kommer hår från den person som kontaminerade idrottaren efter att ha använt Trofodermin® sannolikt att visa högre koncentrationer, som rapporterats i fallet med kontaminering efter behandling av en skadad hund.

Sammanfattningsvis kan närvaron av en förbjuden substans i en idrottares urin inte enbart kopplas till avsiktlig doping. Oavsiktlig exponering för ett dopingmedel kan dock få mycket negativa konsekvenser, inklusive ekonomiska, eftersom den efterföljande avstängnings-perioden kan vara upp till fyra år. Därför är det viktigt att idrottare varnas för personlig eller oavsiktlig/indirekt exponering för dermala preparat som innehåller dopingmedel, såsom i fallet med Trofodermin®. Dessutom måste idrottare vara medvetna om medicinska behandlingar som inkluderar substanser på dopinglistan, även från anhöriga, tränare, vårdpersonal och partners, eftersom dessa kan leda till att små mängder återfinns i idrottarens urin och betraktas som ett dopingbrott. Eftersom idrottare är ansvariga för vad som kommer in i deras kroppar kan det vara svårt att bevisa oskuld. Vid clostebol-relaterade AAF-fall bör urinkoncentrationer bedömas för att utesluta nyligen eller massiv konsumtion. Om dessutom ett hårtest utförs för att stödja scenariot med kontaminering kan idrottaren ha en chans att få reducerad avstängning eller frias helt.

Anabola steroider i testing av hår

Det redovisades ett fall där en 59-årig kroppsbyggare, som var känd för att använda anabola steroider, avlidit av sannolik plötslig hjärtdöd.

Obduktionen ingav inte misstanke om någon annan dödsorsak och i blodet kunde inga anabola steroider påvisas efter döden, medan man i urinen fann mycket små mängder hormoner: testosterone/epitestosterone var 1.56 och boldenon påvisades i den låga koncentrationen 9 ng/mL.

När man däremot undersökte håret kunde man påvisa att personen tagit upprepade kurer med anabola steroider och man fann testosteron (140 pg/mg), testosteron propionat (605 pg/mg), testosteron decanoat (249 pg/mg), boldenon (160 pg/mg), trenbolon (143 pg/mg) och metandienone (60 pg/mg).

Klomifen kan mätas i naglar och hår

Klomifen eller clomifen är en selektiv östrogenreceptormodulator (SERM) som används för att behandla kvinnlig fertilitet vid ovulatorisk dysfunktion. Inom idrotten är klomifen förbjudet att användas av idrottare vid alla tillfällen och listas i avsnitt S4.2 (hormon- och metabolism-modulatorer) av WADA.

Klomifen kan indirekt öka testosteronnivåerna i kroppen och kan mildra vissa biverkningar av missbruk av syntetiska steroider, vilket används exempelvis av idrottare som dopar sig med anabola steroider och efter avslutad kur vill få igång egenproduktionen av testosteron igen.

Trots att klomifen förskrivs till miljontals individer har dess påvisning i mänskligt hår eller nagelklipp aldrig tidigare rapporterats. Syftet med denna studie var att utveckla en specifik metod för att identifiera klomifen i hår och nagelklipp med hjälp av LC-MS-MS. Proceduren tillämpades sedan i ett fall med utmanade dopingsresultat. Metoden innebär sonikering/inkubering i 1 timme av 30 mg pulvriserat material i 1 mL metanol i närvaro av 2 ng diazepam-d5 som intern standard. Kromatografisk separation utfördes med en HSS C18-kolumn med en 15 minuters gradientelution. Efter att ha tillsatt blankt hår och nagel med motsvarande mängder klomifen verifierades linjäritet från 1 till 500 pg/mg. Detektionsgränsen uppskattades till 0,3 pg/mg för båda matriserna. Ingen interferens noterades från endogena föreningar, särskilt steroider.

Klomifen identifierades vid 85 pg/mg i könshåret och 20 pg/mg i fingernagelklippet hos en manlig idrottare som tagit klomifen i dopingsyfte.

Klomifen kan påvisas i hårstrån efter en engångsdos

Klomifen är en selektiv östrogenreceptormodulator. Den används för att behandla kvinnlig infertilitet, men inom idrotten kan det missbrukas för att stimulera produktionen av endogent testosteron hos män (efter doping med anabola steroider). Därför har det förbjudits av WADA både id tävling och träning. Syftet med denna studie var att få data för att kunna tolka koncentrationer hos idrottare.

En frisk försöksperson (man, 62 år gammal) intog en enda terapeutisk dos av klomifen (Clomid™, 50 mg). Hårstrån (blont, 4 cm) samlades in en månad efter intaget. Kroppshår (skägg, armhåla, intimt och bröst) samt finger- och tånaglar samlades in under 4-5 månader. En tidigare metod modifierades för att identifiera och kvantifiera klomifen i keratinhaltiga matriser. 30 mg prov sonicerades och inkuberades i 1 ml metanol, i närvaro av 200 pg klomifen-D5 (intern standard). Efter centrifugering och avdunstning av den organiska fasen analyserades proverna med LC-MS/MS. Linjäritet verifierades i hår- och nagelklippningar mellan 1 och 500 pg/mg. Detektions- och kvantifieringsgränser fastställdes till 0,3 respektive 1 pg/mg. Studien visade att klomifen testades positivt i alla analyserade prover vid 9 pg/mg i huvudhår, från 28 till 486 pg/mg (kroppshår) och från 4 till 57 pg/mg (naglar). Klomifen identifierades för första gången i flera keratinhaltiga matriser. Denna studie visade att en enda oral terapeutisk dos är påvisbar i keratinhaltiga matriser under en lång tid.

gamma-Hydroxybutyrat (GHB) i hårstrå

Många faktorer måste beaktas vid tolkning av håranalyser, inkluderande risken för passiv exponering/kontaminering genom yttre droger i håret eller förekomsten av endogena ämnen, som också kan administreras exogent. I det senare fallet är enbart förekomsten av ämnet i håret otillräcklig för att bekräfta exogen administration.

Ett viktigt exempel på detta är gamma-hydroxybutyrat (GHB). GHB har en dubbel natur, både endogen och exogen, vilket gör att bevisning för exogent intag är komplicerat. Små mängder GHB produceras i olika vävnader, inklusive hjärnan, där det fungerar som både en föregångare och en metabolit till den huvudsakliga hämmande signalsubstansen gamma-aminosmörsyra (GABA). Å andra sidan används GHB både som en rekreationsdrog i olika sammanhang och i DFSA-fall, samt som ett terapeutiskt medel i form av natriumoxybat för behandling av narkolepsi, alkoholabstinenssyndrom och upprätthållande av alkoholavhållsamhet.

Följande databaser (fram till mars 2017) användes: PubMed, Scopus och Web of Science, med sökorden: γ-hydroxybutyrat, GHB, GHB-glukuronid och hår. De huvudsakliga sökorden “GHB” och “γ-hydroxybutyrat” söktes enskilt och sedan i kombination med de andra nyckelorden.

Av de 2304 källor som hittades ansågs endast 20 vara relevanta för denna studie. Sammanställningen av studier som undersökte endogen GHB-koncentration i hår visade ett mycket brett koncentrationsintervall från 0 till 12 ng/mg. För att upptäcka en enskild dos GHB i hår är det vanligtvis nödvändigt att vänta en månad innan håret samlas in, och en segmentell analys av 3-5 mm fragment, samt beräkning av en kvot mellan det målade segmentet och övriga segment, är en tillförlitlig metod för att detektera en enskild GHB-intag. De två enda studierna som hittills har undersökt GHB-glukuronid i hår visar att denna inte verkar ge någon diagnostisk information om GHB-exponering.

JURIDISKA ASPEKTER

Avsaknad av dopingsubstanser i hår kan ledande till ”no fault”-domar

Mätningar av dopingsubstanser inlagrade i hår är inte en godkänd metod för dopingtestning enligt WADA, medan det däremot accepteras av civila domstolar i flera länder. Teoretiskt är det tilltalande genom att man kan få en uppfattning av konsumtion av en substans – exempelvis narkotika, förgiftningssubstanser och dopingpreparat – över tiden. Man utgår då från att hår på huvudet växer cirka 10 millimeter per månad. Likartade resultat över hela hårstråts längd talar för en konstant konsumtion medan större variationer talar för att intaget varit oregelbundet.

Testning av hår är inte lämplig som en enstaka undersökningsmetod för doping eftersom ett negativt test aldrig kan fria en utövare med juridiskt tillräcklig säkerhet. Exempelvis kan tillgänglig metodik inte förväntas ge utslag för ett enstaka intag av exempelvis anabola steroider eller vätskedrivande.

CAS har använt sig av hårtester vid två tillfällen, vid båda tillfällena sedan idrottsutövare uppvisat positiva urinprover avseende cocainnedbrytningsprodukter. Tennisspelaren Richard Gasquet belv friad från misstanken om cocainintag och det ansågs sannolikt att han fått urinmetaboliten genom att kyssa en cociananvändare (hon hade positivt hårtest men inte han). 2o16 blev den kanadensiska stavhopparen Shawnacy Barber friad trots ett positivt test för cocainmetaboliten efter ett negativt hårtest. Man ansåg att hans intima umgänge med en cociananvändaned ”escort girl” dagen före varit orsaken till det positiva testet.*Author to whom correspondence should be addressed. Email: [email protected]

Å andra sidan blev en argentinsk tennisspelare, Luciano Tacchi, inte frikänd efter ytterligare ett test talande för cocainbruk efter att åtta cm-långa delar av ett hårstrå alla innehöll cocain. Han bodde emellertid hos sin moster eller faster och hennes hårstrån uppvisade identiska tecken på cocainbruk varför han till slut blev frikänd.

En canadensisk kanotist, Laurence Vincent Lapoint, en amerikansk softbollspelare, Madilyn Nickles, och en amerikansk boxare, Viriginia Fuchs, hade alla pojkvänner som visade sig i sina hårtester ha den förbjudna substansen ligandrol (en selektiv androgenreceptor antagonist, SARM) och alla de tre kvinnorna blev friade efter det att man gjort det sannolikt att substansen överförts via intimt umgänge till dem.

Två andra idrottsutövare har också blivit friade efter hårtester. Längdhopparen Jarrion Lawson hade trebolon i urinen men inte i håret, vilket uteslöt långtidsanvändning av den anabola substansen. Det antogs att han fått i sig steroiden genom att äta kontaminerat kött dagen före testen. Den kinesiska släggkastaren Wenxiu Zhang hade den anabola steroiden zeranol i urinen, men i hårstråna hade hon mycotoxinet zearalenon, som kan förekomma som kontamination i kött och som bryts ned till zeranol. Hennes hårstrån var negativa för zeranol.

https://orcid.org/0000-0002-4174-5362

Search for other works by this author on:

Oxford Academic

PubMed

Google Scholar

Det bör dock fortfarande understrykas att hårtestning inte ingår som godkänd metod i WADAs regelsamling, men det kan således av CAS i vissa fall användas för att göra det mer eller mindre sannolikt att ett dopingbrott, misstänkt genom ett urin- eller blodprov, begåtts.

REFERENSER