Autolog blodtransfusion visas med DBS-teknik

Autolog blodtransfusion (ABP) påvisad med DBS-prov

Autolog blodtransfusion, det vill säga att tappa blod och senare återinfundera givarens eget blod, är förbjudet av WADA på grund av metodens förmåga att öka aerob uthållighet och maximalt syreupptag. Trots detta är det fortfarande en utmaning att upptäcka autolog blodtransfusion.

För närvarande kan den förbjudna metoden endast upptäckas indirekt via det hematologiska modulen i Athlete Biological Passport (ABP), även om känsligheten verkar förbättras genom att inkludera andra indikatorer för riktad testning, såsom plastmjukgörare från blodpåsar som kan påvisas i urinprover. ABP baseras på statistiska principer där hematologiska värden jämförs longitudinellt med idrottarens egna historiska värden, vilka ligger till grund för individuellt anpassade toleransgränser som kan flagga atypiska värden [14,15]. Specifikt är hemoglobinkoncentration ([HGB]) och OFF-Score ([HGB] – 60 × √retikulocytprocent (RET%)) primära markörer i det hematologiska ABP som genererar atypiska passfynd (ATPF), medan RET% och en multifaktoriell sammansatt poäng, Abnormal Blood Profile Score (ABPS), betraktas som sekundära markörer som kompletterar de primära.

Viktigt är att ABP tidigare upptäckt cirak två tredjedelar av individer som donerat 450 mL blod. På samma sätt, vid transfusion av 450–1350 mL blod hos vältränade cyklister, upptäck-tes 20 procent av individerna av ABP, vilket ökade till 80 procent när en blindad expert-granskare användes under en hel säsong.

ABP:s detektion av ABT försvåras ytterligare av möjligheten att mikrodosering, det vill säga mindre transfusionsvolymer definierade som < 450 mL helblod, används som dopingsmetod. Man har nyligen visat att så lite som 130 mL packade röda blodkroppar är tillräckligt för att förbättra tempoprestation hos vältränade individer. Här var ABP:s känslighet endast 29 procent med 99 procent specificitet upp till 6 dagar efter återinfusion. Följaktligen behövs utveckling av nya biomarkörer som är känsliga för mikrodosering.

Vi har tidigare visat att två erytropoesrelaterade mRNA-biomarkörer är potentiellt lovande markörer för blodtransfusion. Uttrycket av 5’-aminolevulinat-syntas 2 (ALAS2), ett enzym som katalyserar det första steget i hembiosyntesen (succinyl-CoA och glycin till 5-amino-levulinsyra (ALA)), samt karbanhydras 1 (CA1), det nyckelenzym som reglerar cellens pH (CO₂ + H₂O ⇌ HCO₃⁻ + H⁺), förändras hos friska män efter standardiserad blodtappning och transfusion. Båda mRNA-markörerna nedreglerades efter en autolog blodtransfusion av 280 mL packade röda blodkroppar, med lägsta nivå efter 9 dagar. Det är dock okänt om biomarkörerna är känsliga för mikrodosering av röda blodkroppar.

En stor fördel med mRNA-biomarkörerna är möjligheten att pålitligt kvantifiera deras nivåer i torkade blodfläckar (DBS). Insamling av DBS har många fördelar jämfört med traditionell venös blodprovtagning. Till exempel är provtagningen mindre invasiv, provet har högre stabilitet för mRNA vid rumstemperatur och kan skickas utan tids- eller temperatur-begränsningar, vilket avsevärt kan minska fraktkostnader. Enligt återkoppling från fältet föredras DBS dessutom framför venös provtagning av både idrottare och dopingkontrollanter, och metoden har framgångsrikt tillämpats för rutinmässiga antidopingsanalyser.

Man genomförde nu en randomiserad, placebokontrollerad studie med 47 tränade individer (24 kvinnor; VO₂peak 56 ± 7 mL/min/kg). Försöksgruppen donerade 450 mL blod, av vilket återinfusion 130 mL packade röda blodkroppar efter 4 veckor. Efter blodtappning ökade ALAS2, CA1 och RET% med 270, 200 respektive 150 procent. Blindad tolkning av individuella mRNA-profiler uppnådde >95 % känslighet och specificitet för att upptäcka ABMT.

Man drog slutsatsen att ALAS2-uttryck mätt via minimalt invasiva DBS-prover är en lovande biomarkör för att identifiera autologa blodmikrotransfusioner. Denna metod kan stärka antidopingsarbetet genom att förbättra känsligheten för små transfusionsvolymer som annars undgår detektion i traditionella ABP-markörer.

Referens: Andersen AB, Oliveira JA, Loria F, Bejder J, Salamin O, Kuuranne T, Nordsborg NB, Leuenberger N. mRNA biomarkers in dried blood spots may improve detection of autologous blood micro-transfusions using an individualized approach. Drug Test Anal 2025; 17: 2291-300.